MGMT Gene wycisza i korzysta z temozolomidu w glioblastomie ad

Ustaliliśmy status metylacji promotora MGMT w tkankach nowotworowych od pacjentów, którzy zostali włączeni do randomizowanego badania, które wykazało przewagę przeżycia wśród pacjentów leczonych temozolomidem i radioterapią w porównaniu z samą radioterapią.16 Metody
Pacjenci i leczenie
Pacjenci zostali włączeni do randomizowanej próby chemioradioterapii (temozolomide plus radioterapia) w porównaniu z samą radioterapią (przeprowadzoną przez Europejską Organizację Badań i Leczenia Raka oraz Narodowy Instytut Raka w Kanadzie [NCIC]) (test EORTC 26981/22981 i badanie NCIC CE.3) .16 Pacjenci w grupie eksperymentalnej otrzymywali środek alkilujący temozolomid (Temodal lub Temodar, Schering-Plough) w dawce 75 mg na metr kwadratowy powierzchni ciała dziennie podczas standardowej frakcjonowanej radioterapii (60 Gy) przez 6 do 7 tygodni i w dawce od 150 do 200 mg na metr kwadratowy na dzień przez 5 dni w każdym 28-dniowym cyklu po radioterapii, do sześciu cykli. W przypadku progresji guza, według uznania dyskonta, ratownicy lub terapia drugiego rzutu była podawana; większość pacjentów otrzymała dodatkową chemioterapię. Wszyscy pacjenci wyrazili pisemną zgodę na badania molekularne guza, a protokół został zatwierdzony przez komisję etyczną w każdym ośrodku.
Ekstrakcja DNA i reakcja łańcuchowa polimerazy specyficzna dla metylacji
Genomowy DNA wyizolowano z jednej lub dwóch wycinków parafiny tkanki glejaka (zestaw ekstrakcji DNA Wax-S4530, Chemicon) (trawienie proteinazą trwało maksymalnie sześć godzin). DNA denaturowano wodorotlenkiem sodu w objętości 35 .l i poddawano obróbce wodorosiarczynem w objętości 360 .l (4,4 M wodorosiarczynu sodu i 20 mM hydrochinonu) przez pięć godzin w temperaturze 55 ° C, a następnie oczyszczono (Wizard Clean-Up System A7280, Promega). Niemetylowana cytozyna, ale nie jej metylowany odpowiednik, jest modyfikowana przez uracyl. Łańcuchową reakcję polimerazy specyficznej wobec metylacji (PCR) przeprowadzono w dwuetapowym podejściu17. Wyniki potwierdzono w niezależnym eksperymencie, poczynając od reisolacji DNA z guza. Produkty PCR rozdzielono na 4% żelach agarozowych. Badacze, którzy wybrali i przeanalizowali próbki glejaka, byli zaślepieni na wszystkie informacje kliniczne.
Analiza statystyczna
Całkowite i wolne od progresji krzywe przeżycia zostały oszacowane techniką Kaplana-Meiera i porównane z użyciem dwustronnego testu logarytmicznego. Wszystkie porównania leczenia są prezentowane według intencji leczenia, zgodnie z randomizowanym przydziałem. Model proporcjonalnych hazardów Coxa dopasowano do oceny wartości prognostycznych i prognostycznych statusu metylacji promotora MGMT, leczenia protokołem i potencjalnych czynników prognostycznych18, które uznano za statystycznie istotne w tej populacji na podstawie testów jednowymiarowych.
Organizacja badania
Projekt ten został zainicjowany i zrealizowany bez udziału komercyjnego sponsora. Dr Hegi zaprojektował i nadzorował badanie translacyjne i napisał manuskrypt, z wkładem od współautorów. PCR specyficzny dla metylacji został przeprowadzony przez panią Diserens. Analizę statystyczną przeprowadził Pan
[podobne: oddech biota, szmer skurczowy, tętno nitkowate ]
[przypisy: uchyłek dwunastnicy, olx słubice, szmer skurczowy ]