Miopatia mitochondrialna z wadą transportu mitochondrialnego-białka ad 5

Pokazało to, że w homogenacie mięśniowym były normalne ilości białka Rieske i potwierdził niedobór tego białka w mitochondriach pacjenta. Dalsze bloty wykazały obecność białka Rieske w cytozolu mięśniowym (dane nie pokazane). Kompleks IV
Immunobloty mitochondriów pacjenta z przeciwciałami na kompleks IV nie różniły się zasadniczo od tych kontrolnych (dane nie pokazane).
Badania nad białkami Rieske
W celu dalszego zbadania stosunku reagujących krzyżowo białek z przeciwciałem białkowym Rieske w homogenacie i preparatach mitochondrialnych, wykorzystaliśmy glifazę V8 gronkowcową do wytworzenia mapy peptydowej. Enzym ten rozszczepia białka po stronie karboksylowej reszt asparaginianu i glutaminianu, a zatem wytwarza peptydy o identycznej ruchliwości w białkach o tej samej sekwencji aminokwasów. Wyniki pokazały, że zarówno ludzki homogenat, jak i białka mitochondrialne wiążące się z przeciwciałem swoistym dla białka Rieske miały identyczne miejsca cięcia z tym enzymem (dane nie pokazane). Sugeruje to, że homogenat i białka mitochondrialne są ze sobą spokrewnione.
Immunoblot z przeciwciałem białkowym Rieske wytworzył prążki 26 i 22,5 kd z mitochondriami szczurzego wątroby. Prążek 26-kD został selektywnie usunięty, gdy nietknięte mitochondria zostały poddane immunoblottingowi po traktowaniu proteinazą K. Ten polipeptyd musi zatem być eksponowany na błonie zewnętrznej, podczas gdy białko 22,5-kdowe musi znajdować się w mitochondriach.
Wyniki mapowania peptydów i traktowania proteinazą K wykluczają możliwość, że prążki 23,3-kd i 22,5-kd reprezentują produkty rozkładu białek 26-kd. Niższe prążki zaobserwowano w próbkach homogenatu ludzkiego mięśni, ale tylko wtedy, gdy zastosowano wysokie obciążenia. W tych okolicznościach prążki o mniejszej masie stanowiły frakcję mitochondrialną białka Rieske w homogenacie.
Dyskusja
Przedstawione tu dane histologiczne i biochemiczne sugerują, że pacjent cierpi na liczne niedobory łańcucha oddechowego, ze specyficznymi defektami polipeptydowymi dehydrogenazy bursztynianowej i kompleksu III. Około 14 pacjentów z niedoborem kompleksu III do tej pory zostało zgłoszonych do tej pory. [24] Tylko jeden miał znacznie zmniejszoną aktywność dehydrogenazy bursztynianowej, a główny defekt biochemiczny był uważany za białko wiążące koenzym Q.25 U naszego pacjenta wystąpił specyficzny niedobór obu 27,2-kd białko żelazo-siarka dehydrogenazy bursztynianowej i białko Rieske z kompleksu III. Obecność białka Rieske w homogenacie mięśni i cytosolu oraz jego wirtualna nieobecność w mitochondriach sugerują defekt w transporcie tego białka z cytosolu do mitochondriów.
Transport białka Rieske z Neurospora crassa do mitochondriów obejmuje przetwarzanie preproteiny (względna masa cząsteczkowa, 27,9 kd) przez pośrednią postać, zanim dojrzałe białko (względna masa cząsteczkowa, 24,7 kD) zostanie wprowadzone do wewnętrznej błony mitochondrialnej. Masa cząsteczkowa dojrzałego białka neurospora ściśle odpowiada masie kompleksu III serca bydlęcej (względna masa cząsteczkowa 21,7 kd) .27 Nasze odkrycie trzech reagujących krzyżowo pasm 26, 23,3 i 22,5 kd w kontrolnych próbkach mitochondrialnych poddanych immunoblottingowi z przeciwciałem swoistym dla białka Rieske może odpowiadać odpowiednio prekursorowi, pośrednim i dojrzałym formom białka w ludzkim mięśniu szkieletowym
[więcej w: trombomodulina, przewlekłe zapalenie spojówek, zafriko com ]